توليد پروتئين نوتركيب BM86 كنه هيالو آناتوليكوك در سيستم يوكاريوتي (مخمر) در زمينه الف : نيازهاي انساني ، سلامتي و بهداشت يكي از بهترين كانديداها براي ايجاد واكسن نوتركيب موثر بر عليه كنه، پروتئين هاي روده مياني (midgut antigen) مي باشد. با توجه به اين كه كنه هاي بومي هر منطقه ممكن است كه تفاوت هايي را در نوع آنتي ژن خود داشته باشند، لذا جداسازي اين آنتي ژن ها از كنه هاي هر منطقه در جهت استفاده از آنها در توليد واكسن بسيار لازم است. در اين تحقيق به منظور پروتئين نوتركيب آنتي ژن BM86 كه از جمله مهمترين آنتي ژن هاي كنه هيالوما آناتوليكوم مي باشد، ژن مربوط به اين پروتئين جدا و تكثير گرديد و پس از ورود به پلاسميد نوتركيب pPICZαA به درون مخمر ميزبان منتقل شد. در نهايت با استفاده از تكنيك هاي مهندسي نوتركيب پروتئينجديدي بر پايه پلاسميد نوتركيب ايجاد شد. ايجاد و بيان پروتئين نوتركيب BM86 مربوط به كنه هاي منطقه ايران از نوآوري هاي اين تحقيق است كه تاكنون انجام نشده است كه در نهايت مي تواند در طراحي واكسن موثر و كارا در برابر عفونت كنه مفيد باشد.

خلاصه: "توليد فيوژن پروتئين نو تركيب حاوي پروتئين M2e ويروس آنفلونزاي انساني و مرغي فيوز شده با قسمت ادجونتي مولكول HSP70 مايكوباكتريوم توبر كلوزيس (610-70359HSP-*AM2e2-HM2e*2) در سيستم پروكاريوتي(باكتري) در زمينه : بخش الف: نيازهاني انساني؛ سلامتي و بهداشت يكي از بهترين كانديداها براي ايجاد واكسن نو تركيب وسيع الطيف موثر بر عليه تحت تيپ ويروس آنفلونزا تيپ آ، قسمت خارج سلولي پروتئين كانال يوني ويروس M2e مي باشد كه پروتئيني بسيار پايدار و در بين تمام ايزوله هاي اين ويروس ساختاري يكسان و محافظت شده دارد. لذا با توجه به كوچكي آن خاصيت ايمنوزنسيتي خيلي كمي كه با فيوز كردن 4 تا ژن M2e به صورت دو تائي از ايزوله ويروس آنفلونزاي انساني و مرغي و سپس فيوز آن ژن نوتركيب حاصليه به قسمت انتهائي ژن HSp70 كه نقش ادجونتي خيلي خوبي دارد، آن را جهت ساخت واكسن آنفلونزاي نو تركيب وسيع الطيف ايمنوژن تر و كاراتر ساخيتم. در اين تحقيق به منظور ايجاد فيوژن پروتئين نو تركيب (610-359-2AM2e-HM2e-HSP70، ژن مربوط به اين پروتئين به طور مستقل جدا و تكثير و سپس فيوز گرديدند و پس از ورود به پلاسميد نو تركيب pQE-60، به درون سلول بياني باكتري منتقل شد. در نهايت با استفاده از تكنيك هاي مهندسي نو تركيب پروتئين جديدي بر پايه پلاسميد نو تركيب ايجاد شد. فيوژن چهار قطعه ژن M2e و قسمت انتهائي ژن HSP70 مايكوباكتريوم بيان فيوژن پروتئين نو تركيب 2AM2e-HSP70359-610-2HM2e مربوط به سويه آنفلونزاي انساني و مرغي از نو آوري هاي اين تحقيق است كه تا كنون انجام نشده است كه در نهايت مي تواند در طراحي واكسن موثر و كارا در برابر كليه ويروس آنفلونزاي تيپ آ مفيد باشد.

"توليد فيوژن پروتئين نوتركيب M2e ويروس آنفلونزاي تيپ A (سوش H9N2)به همراه ژن HSP70 مايكوباكتريوم توبركلوزيس درسيستم پروكاريوتي" درزمينه : بخش الف: نيازهاي انساني؛ سلامتي و بهداشت. يكي ازبهترين كانديداها براي ايجاد واكسن موثرو داراي اثر طولاني مدت بر عليه آنفولانزا، پروتئين ماتريكس اين ويروس مي باشد كه متاسفانه به دليل كوچك بودن و ماهيت ايمني زائي ضعيف آن استفاده از به تنهايي موثرنخواهد بود. دراين تحقيق به منظور حل مشكل ايمني زا بودن پروتئين خارج سلولي ماتريكس (M2e)، ژن مربوط به اين پروتئين جدا و تكثر گرديد و به قسمت انتهاي كربوكسيل از ژن HSP70 مايكوباكتريوم توبركلوزيس، كه داراي خاصيت ادجواني است، متصل شد. در نهايت با استفاده از تكنيك هاي مهندسي نوتركيب پروتئين جديدي بر پايه پلاسميد نوتركيب HSP70CPQE60-M2e ايجاد شد. ايجاد و بيان پروتئين نوتركيب M2e-HSP70 از نوآوري هاي اين تحقيق است كه تاكنون بررسي نشده است كه در نهايت مي تواند در طراحي واكسن موثرو كارا دربرابر عفونت آنفولانزا مفيد باشد. ايجاد و بيان پروتئين نوتركيب M2e-HSP70 از نوآوري هاي اين تحقيق است كه تاكنون بررسي نشده است كه در نهايت مي تواند در طراحي واكسن موثرو كارا دربرابر عفونت آنفولانزا مفيد باشد.

"توليد فيوژن نوتركيب M2e ويروس آنفلونزاي تيپ A (سوش H9N2) به همراه ژن Hsp70 مايكوباكتريوم توبركلوزيس در سيستم يوكاريوتي (مخمر)" در زمينه: بخش الف: نيازهاي انساني،سلامتي وبهداشت؛ يكي از بهترين كانديداها براي ايجاد واكسن موثر و داراي اثر طولاني مدت بر عليه آنفولانزا، پروتئين ماتريكس آن ويروس مي باشد كه متاسفانه به دليل كوچك بودن و ماهيت ايمني زائي ضعيف آن استفاده از آن به تنهايي موثر نخواهد بود. در اين تحقيق به منظور حل مشكل ايمني زا بودن پروتئين خارج سلولي ماتريكس (M2e)، ژن مربوط به اين پروتئين جدا و تكثر گرديد و به قسمت انتهاي كربوكسيل از ژن Hsp70 مايكوباكتريوم توبركلوزيس ، كه داراي خاصيت ادجواني است، متصل شد. درنهايت با استفاده از تكنيك هاي مهندسي نوتركيب پروتئين جديدي بر پايه پلاسميد نوتركيب Hsp70c pPICZaA –M2e- ايجاد شد. ايجاد و بيان پروتئين نوتركيب M2e-Hsp70 از نو آوري هاي اين تحقيق است كه تا كنون بررسي نشده است كه در نهايت مي تواند در طراحي واكسن موثر و كارا در برابر عفونت آنفولانزامفيد باشد.

با ورود واكسن هاي نسل جديد عليه نيوكاسل و استفاده گسترده از آنها در صنعت مرغداري نياز به كيت مناسب الايزا براي تعيين سطح ايمني جوجه هاي واكسينه در جهت تعيين كارايي واكسيناسيون به صورت گسترده مورد نياز خواهد بود. دراين راستا تلاش شد كيت الايزاي مناسب كه پاسخوي نيازهاي جامعه باشد تهيه گردد. كيت هاي توليد شده با حساسيت بالا قادر به تعيين تيتر سرمي ضد پروتئين HN-F ويروس نيوكاسل مي باشد. جهت ساخت كيت مناسب دقيق و داراي تكرارپذيري بالا بايد مقادير مناسب آنتي ژن كه در كف پليت coat مي شود، غلظت مناسب محلول Blocking سرم و آنتي بادي كونژوگه تعيين گردد و تكرارپذيري كيت در مورد يك سرم خاص با غلظت مشخص محرز شود. روشي كه جهت تعيين تيتر سرمي مورد استفاده قرار گرفت الايزا غير مستقيم مي باشد. مقدار غلظت سرم براساس واكنش بين آنتي بادي كونژوگه ضد سرم انسان و با جوجه با كمك teramethylbenzidine 5 و 5 و 3 و TMB در طول موج 450nm با دستگاه Elisa Reader تعيين مي گردد.

با ورود واكسن هاي نسل جديد عليه آنفلوانزا واكسن هاي مبتني بر M2e و استفاده گسترده از آنها در صنعت مرغداري و نيز در جوامع انساني نياز به كيت مناسب الايزا براي تعيين سطح ايمني جوجه ها و نيز افراد واكسينه در جهت تعيين كارايي واكسيناسيون به صورت گسترده مورد نياز خواهد بود. در اين راستا تلاش شد كيت الايزاي مناسب كه پاسخگوي نيازهاي جامعه باشد تهيه گردد. كيت هاي توليد شده با حساسيت بالا قادر به تعيين تيتر سرمي ضد پروتئين سطحي ويروي آنفلوانزا M2e مي باشد. جهت ساخت كيت مناسب دقيق و داراي تكرار پذيري بالا بايد مقادير مناسب آنتي ژن كه در كف پليت coat مي شود غلظت مناسب محلول Blocking سرم و آنتي بادي كونژوگه گردد و تكرار پذيري كيت در مورد يك سرم خاص با غلظت مشخص محرز شود. روشي كه جهت تعيين تيتر سرمي مورد استفاده قرار گرفت الايزا غير مستقيم مي باشد. مقدار غلظت سرم براساس واكنش بين آنتي بادي كونژوگه ضد سرم انسان و يا جوجه با كمك 3.5.5 TMB tetramethylbebnzidine در طول موج 450nm با دستگاه Elisa Reader تعيين مي گردد.